Физиология размножения и репродуктивная патология собак - Дюльгер Георгий Петрович. Страница 12

Охлаждение — наиболее отработанный способ хранения спермы вне организма. Для разбавления и кратковременного хранения спермы собаки обычно используют молочную и цитратно-желточную среды.

Молочная среда. Свежее цельное или лучше обезжиренное коровье молоко — 100 мл, пенициллин и (или) стрептомицин — 0,05…0,1 г.

Молоко берут от клинически здоровых коров с отрицательными результатами исследований на туберкулез, лептоспироз, бруцеллез, а также мастит. Желательно подобрать коров, продуцирующих молоко низкой жирности, поскольку молочные жировые шарики значительно затрудняют оценку качества разбавленной спермы. Молоко обязательно прогревают на водяной бане в течение 10 мин при температуре 92…96 °C для разрушения некоторых его белков, оказывающих на спермии токсическое действие. Затем молоко процеживают через 3…4 слоя стерильной марли, охлаждают до температуры 35…39 °C и добавляют антибактериальный препарат.

Цитратно-желточная среда. Цитрат натрия трех-замещенный пятиводный — 2,32 г, свежий желток куриного яйца — 20 мл, пенициллин и (или) стрептомицин — 0,05…0,1 г, вода дистиллированная (бидистиллированная) — 80 мл.

Навеску цитрата натрия вносят в чистую стерильную колбу. Вливают в колбу прокипяченную и остуженную дистиллированную воду; фильтруют, добавляют антисептик и желток куриного яйца. Перед извлечением желтка скорлупу яйца обеззараживают при помощи бактерицидной лампы или спиртового ватного тампона.

Среды готовят непосредственно перед получением спермы. Последнюю разбавляют сразу же после оценки ее качества. Температура спермы и среды должна быть одинаковой, чтобы предупредить температурный шок спермиев. Разбавляют сперму в градуированном смесителе, при этом среду добавляют небольшими порциями. После добавления каждой порции смеситель вращают, чтобы равномерно смешать среду и сперму. Разбавленную сперму медленно охлаждают и хранят при температуре 2…5 °C до 4…5 сут. В 1-е сутки хранения оплодотворяющая способность охлажденной спермы соответствует свежеполученной, на 4-е сутки она лучше, чем замороженно-оттаянной.

Криоконсервация, или замораживание, — самый перспективный способ хранения спермы вне организма. Впервые собаку успешно осеменили замороженно-оттаянной спермой в 1969 г. в США.

Методические основы замораживания и хранения спермы собаки и быка одинаковы. Сперму разбавляют в 4…9 раз криопротекторной средой (до концентрации не менее 40…80 млн активных спермиев в 1 мл). В качестве криопротекторной среды обычно используют трис-буферный разбавитель, содержащий 20% желтка куриного яйца, 4…16% глицерина, или же лактозо(11%) — желточно(20%) — глицериновую(4…16%) среду. Сперму замораживают в ампулах объемом 1 мл, соломинках (пайеттах) объемом 0,5…1 мл или гранулах; в парах жидкого азота или на блоках твердого диоксида углерода (-79 °C) и хранят в жидком азоте (-196 °C).

Сперму размораживают на водяной бане (при температуре 38…40 °C) в течение 30 с. Активность размороженной спермы собак обычно составляет 6…7 баллов. Сперму активностью ниже 4 баллов не используют.

Результативность осеменения собак замороженно-оттаянной спермой оставляет желать лучшего, и поэтому криоконсервирование спермы собак практикуют редко. По данным Американского клуба собаководов, в период с 1981 по 1991 г. от самок, осемененных замороженно-оттаянной спермой, получили всего 240 пометов.

Способы искусственного осеменения. Самок осеменяют на 10-е и 12-е сутки после начала течки (проэструса), на 4-е и 6-е сутки половой охоты или же на 2-е и 4-е сутки после проявления преовуляторного пика ЛГ.

Как известно, продолжительность проэструса у собак может сильно варьировать, по этой причине правильно выбрать время осеменения, ориентируясь на дату начала течки, удается далеко не всегда. Из-за вариабельности овуляции нельзя быть уверенным в точности выбора и при ориентации на дату начала половой охоты. Наиболее правильно оптимальное время осеменения собак можно выбрать по дате проявления преовуляторного пика ЛГ, используя прямые и непрямые методы его определения (картина влагалищных мазков, многократные измерения концентрации прогестерона или же ЛГ в крови).

Разработано два способа искусственного осеменения собак — влагалищный и маточный.

Влагалищный способ на сегодняшний день остается основным. Самку удерживают в стоячем положении. Половые органы ее обмывают теплой водой и орошают 1%-м раствором бикарбоната натрия. По верхнему своду преддверия влагалища и влагалища вводят укороченный стерильный полистироловый катетер для осеменения коров цервикальным способом с ректальной фиксацией шейки матки. Продвижение катетера к цервикальному каналу контролируют рукой через брюшную стенку. С помощью резиновой трубочки к катетеру присоединяют стерильный одноразовый шприц со спермой. Заднюю часть тела собаки поднимают на левое бедро осеменатора, сидящего на стуле. Собаку удерживают в наклонном положении: спереди за ошейник — владелец, сзади — осеменатор. Левой рукой осеменатор удерживает самку за левое бедро, правой медленно вводит сперму из шприца во влагалище. Катетер извлекают, в преддверие и каудальную часть влагалища вводят на 10 мин большой палец для имитации «полового замка» и стимуляции антиперистальтических сокращений в матке. Наклонное положение самки при введенном в ее влагалище пальце способствует быстрому проникновению спермы в матку. По материалам японских исследователей (Tsuitsui Т. et al., 1989), уже через 2,5 мин после введения спермы в краниальную часть влагалища спермии оказываются в полости верхушки рогов матки. После осеменения собаку выгуливают 30 мин, не позволяя ей бегать, прыгать и садиться. Хорошие результаты получают при осеменении собак свежеполученной спермой. Эффективность осеменения замороженно-оттаянной спермой остается очень низкой, охлажденной — зависит от срока ее хранения.

Внутриматочный способ практикуют редко. Этот метод разработан, чтобы повысить эффективность осеменения замороженно-оттаянной спермой. В литературе описаны два нехирургических и два хирургических способа внутриматочного осеменения собак.

Нехирургический внутриматочный способ осеменения собак с помощью норвежского катетера, применяемого для осеменения лисиц, разработан в Швеции. Используют: металлический катетер длиной 20…50 см, диаметром 0,5…1мм, нейлоновую протектор-ную оболочку, одноразовый шприц на 2 мл.

Металлический катетер в нейлоновой протекторной оболочке вводят по верхнему своду влагалища в его краниальную часть. С помощью большого и указательного пальцев захватывают шейку матки и контролируют продвижение катетера до входа в церви-кальный канал. Металлический катетер выдвигают из защитной оболочки. Осторожно манипулируя катетером и шейкой матки, отыскивают вход в канал шейки матки. Цервикальный канал проходят, вращая катетер и оттягивая шейку матки назад. Длина канала шейки матки составляет всего 0,5…1 см. Сперму вводят, удостоверившись, что кончик катетера находится в теле матки. Катетер извлекают. Самке придают наклонное положение и удерживают в нем в течение 10 мин, введя во влагалище большой палец.

Недостатки способа: неприемлем для нервных и тучных собак; связан с риском травмирования и инфицирования половых органов самки; технически трудновыполним — необходимы специальная подготовка и постоянная практика. Опытный ветеринарный врач на отыскание шейки матки и введение катетера в полость тела матки затрачивает около 1 мин.

Нехирургический внутриматочный способ осеменения при помощи эндоскопа разработан в США. Используют: цистоэндоскоп диаметром 3 мм, длиной 30 см для визуализации шейки матки, пластиковый катетер для катетеризации мочевого пузыря у самцов или ангиографический катетер диаметром 3 мм.

Преимущества использования эндоскопа: инструмент для осеменения вводят в цервикальный канал под визуальным контролем, заметно снижен риск травмирования и инфицирования половых органов.

Недостатки способа: неприемлем для нервных самок и самок с длинным влагалищем; процедура внутриматочного осеменения очень сложна и трудоемка, связана с применением дорогих инструментов и необходимостью специальной предварительной подготовки.