Полный медицинский справочник фельдшера - Вяткина П.. Страница 141
Помимо физиологических, выделено более 200 форм патологических гемоглобинов, отличающихся друг от друга физико-химическими свойствами, в частности различной электрофоретической подвижностью и разным отношением к щелочам. Среди гемоглобинопатий наиболее известна гемоглобинопатия S – серповидно-клеточная анемия.
Одним из наиболее широко распространенных методов, позволяющих выявить патологические гемоглобины, является электрофоретический метод исследования. Исследование патологических гемоглобинов является трудоемким и проводится в специализированных лабораториях.Эритроциты
Эритроциты – наиболее многочисленная популяция клеток.
В кровеносном русле при нормальных физиологических условиях эритроцит имеет форму двояковогнутого диска. Сухое вещество эритроцита содержит около 95 % гемоглобина, остальные 5 % приходятся на долю других белков, липидов, ферментов. Основная функция эритроцитов – снабжение тканей кислородом и транспорт углекислого газа. Они участвуют в поддержании буферного ионно-водного равновесия, взаимодействуют с циркулирующими иммунными комплексами за счет Fс-рецепторов клеточной мембраны, обладают антигенными свойствами. Продолжительность жизни эритроцитов – 100–120 дней, разрушаются они макрофагами селезенки.Подсчет эритроцитов в крови осуществляется двумя методами – в счетной камере и гематологическом анализаторе.
Унифицированный метод подсчета в счетной камере
Принцип
Подсчет эритроцитов под микроскопом в определенном количестве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл крови, исходя из объема квадратов и разведения крови.
Реактивы
0,9 %-ный раствор хлорида натрия.
Специальное оборудование
Счетная камера Горяева.
Микроскоп.
Ход исследования
Исследуемую кровь разводят в 200 раз. Для этого в сухую пробирку отмеривают 4 мл реактива 1. Пипеткой набирают 20 мкл крови. Кончик пипетки вытирают фильтровальной бумагой или марлей и кровь выдувают на дно пробирки с реактивом 1, пипетку тщательно промывают в верхнем слое жидкости, повторно набирая ее и выдувая в пробирку, содержимое пробирки перемешивают и оставляют стоять до момента счета (рекомендуется считать эритроциты в течение ближайших 2–3 ч после взятия крови, а при гемолитических и В12-дефицитной анемии – сразу после взятия, так как эритроциты могут разрушиться).
Подготавливают счетную камеру: протирают насухо камеру с сеткой и покровное стекло, затем покровное стекло притирают к камере, слегка надавливая на него таким образом, чтобы по краям его появились радужные полосы (это свидетельствует о требуемой высоте камеры – 0,1 мм).
Заполняют счетную камеру разведенной кровью: предварительно несколько раз тщательно встряхивают содержимое пробирки, затем пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой отбирают каплю разведенной крови и подносят ее к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы она равномерно, без пузырьков воздуха, заполнила всю поверхность камеры с сеткой, не затекая в бороздки. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 мин (для оседания эритроцитов).
Для подсчета эритроцитов, не меняя горизонтального положения камеры, помещают ее на столик микроскопа и с помощью малого увеличения микроскопа (объектив 8х, окуляр 10х) находят верхний левый край сетки (для лучшего контрастирования следует опустить конденсор и прикрыть диафрагму). Счет производят в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых, т. е. в 80 малых квадратах. Рекомендуется считать клетки в квадратах сетки, расположенных по диагонали. Для того чтобы одни и те же эритроциты, лежащие на линиях, не попали дважды в счет, принято для каждого квадрата, кроме элементов, лежащих внутри квадрата, считать расположенные на определенных двух линиях (например, на левой и верхней).
Расчет количества эритроцитов
Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят исходя из разведения крови (200), числа сосчитанных квадратов (80) и объема 1 малого квадрата (1/4000 мкл) по следующей формуле:
X = (а х 4000 х 200) / 200,
где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови;
а – число сосчитанных эритроцитов.
В результате сокращения Х = а х 10 000.
Причины ошибок при подсчете эритроцитов:
1) неточность при взятии крови в пипетку;
2) неудовлетворительная градуировка пипеток;
3) образование сгустка крови;
4) неправильное притирание покровного стекла камеры или недостаточная его толщина (менее 0,3 мм);
5) подсчет производят сразу после заполнения камеры, когда клетки еще не успели осесть на дно;
6) плохо вымытые и недостаточно высушенные пипетки и пробирки;
7) недоброкачественность реактивов, вызывающих гемолиз;
8) любое отклонение от правил подготовки камеры, ее заполнения и подсчета клеток.Метод автоматического подсчета эритроцитов с помощью счетчиков и гематологических анализаторов облегчает выполнение этого исследования и делает его более производительным.
Унифицированная методика автоматического подсчета эритроцитов
При работе с гематологическими счетчиками подготовка пробы (разведение) осуществляется вручную. При использовании гематологических анализаторов отбор пробы крови и ее обработка происходят без участия лаборанта.
Принципы работы
Принцип работы большинства анализаторов основан на кондуктометрическом методе: определенное количество разведенной изотоническим раствором натрия хлорида или другого электролита крови пропускается через микроотверстие, проходящая через него клетка увеличивает сопротивление между электродами, и возникающий импульс передается на счетное устройство с цифровой индикацией.
Ход исследования
Ход исследования выполняется в соответствии с инструкцией, прилагаемой к анализатору.
Нормальные величины
Количество эритроцитов в крови здорового человека составляет, по данным А. И. Воробьева, у мужчин – 4,0–5,1 Т/л, у женщин – 3,7–4,7Т/л.
Клиническое значение
Снижение количества эритроцитов (эритроцитопения) является одним из основных критериев анемического синдрома. От истинный анемии необходимо отличать гидремию, связанную с увеличением объема плазмы за счет притока тканевой жидкости. Причинами анемии являются кровопотери, нарушения кроветворения в костном мозге и повышенный гемолиз. Кроме того, уменьшение количества эритроцитов имеет место при лейкозах, множественной миеломе, неходжкинских лимфомах, системной красной волчанке, ревматоидном артрите, метастазах злокачественных опухолей и др. Уменьшение количества эритроцитов наблюдается также при недостаточном содержании белка в пище, голодании, вегетарианской диете.
Увеличение количества эритроцитов в единице объема крови называется полиглобулией или эритроцитозом. Причины эритроцитозов представлены в таблице 20.Таблица 20. Увеличение количества эритроцитов в единице объема крови
Окраска эритроцитов
Эритроциты окрашиваются кислыми красителями в розовато-красный цвет. Степень оксифилии клетки обусловлена присутствием гемоглобина и его количеством. Эритроциты здоровых людей имеют равномерную окраску и небольшое просветление в центре (нормохромия). Бледная окраска эритроцитов с широкой неокрашенной центральной частью называется гипохромией. Гипохромия эритроцитов обусловлена низким содержанием гемоглобина в эритроцитах и чаще характерна для дефицита железа, но также имеет место при свинцовом отравлении, талассемии. Гипохромия обычно сочетается с микроцитозом.
Выделяют три степени гипохромии:
– 1 (+) – просветление в центре несколько больше нормы;
– 2 (++) – окрашенная часть представлена в виде узкой ленты;
– 3 (+++) – окрашенная часть представлена в виде очень узкого кольца.
Усиленная окраска эритроцитов называется гиперхромией, обусловлена увеличением объема эритроцитов и обычно сочетается с макрои мегалоцитозом.